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LAMP METHOD AND GENIE PLATFORM

說明

LAMP METHOD AND GENIE PLATFORM

時間:101912 () 14:00~16:00  地點:立夫教學大樓 1 104 講堂講者:Jun Kimura, Ph. D.( 木村淳) NIPPON GENE CO., LTD

簡介:本次特別邀請日本基因公司(NIPPON GENE CO., LTD.) 木村淳博士(Dr. Jun Kimura)來台演講,說明LAMP(Loop-mediated Isothermal Amplification) 原理及應用:
LAMP
技術的關鍵在於特殊的primer設計以及一個具有「置換template模板股」活性的DNA 聚合酶,這個方式中的primer分成兩個部分,一部分(primer5’端)能直接和template3’端互補結合,另一部分(primer 3’端)則藉由一次轉折後(形成一loop),和template略接近5’端的序列互補。
LAMP
技術可增幅出具有自我互補能力的DNA片段,形成具有莖環(stem-loop)的啞鈴型結構,藉此連續且重複反應,產生大量的DNA片段,在反應的過程中會有焦磷酸的釋放,與反應液中的鎂離子會形成白色的焦磷酸鎂(magnesium pyrophosphate)沉澱,隨著反應時間的增加,用肉眼即可觀察到大量的白色沉澱,也就是有檢測到目標物。有時尚可加入核酸染劑,然後用UV照射來觀察反應結果,易宜觀察。

LAMP
PCR的比較:
LAMP
的優點在於每次增幅後,不需要以高溫(94℃)將PCR產物變性(denature)為單股,便能有一段單股結構讓primer黏合,持續PCR 的反應,故只需在65℃便能完成反應,不需要具升降溫功能的聚合脢連鎖反應器(PCR machine),LAMP法具有real time PCR的功能,既省時又省經費。

LAMP
的特點大致有下列幾點:
(
) 不需要昂貴的儀器,只需要水浴槽或加熱器等恆溫器即可。對於某些田間檢測、偏遠地區實驗室來說,相當簡單實用。
(
) 因為引子對可辨識目標物6個特異性的區段,所以專一性相對提高。
(
) 反應時間通常只需要40~60分鐘,相較於其它大多數的技術為快,所以可以節省反應時間,在檢防疫的檢測工作上相當有利。
(
) 本方法的靈敏度當高,比一般PCR反應高100~1,000倍,可與Real-time PCR相差不多。
(
) 檢測反應所產生的白色沉澱用肉眼或濁度計即可觀察,相當簡便。若再加入核酸染劑則靈敏度則更佳。
(
) 只要加入反轉錄酶,對於RNA病毒或其它 RNA目標物亦可利用本方法來做檢測。
(
) 如果實驗室有Real-time PCR的儀器,本方法亦可搭配該儀器進行目標物「定量」的檢測。
LAMP
法可應用as Genie Platform,如SNP Typing等,本場演講會有精闢的說明。

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備註
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公告時間: 2012-09-11 09:40:34

 

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