LAMP METHOD AND GENIE PLATFORM

時間：101年9月12日 (三) 14:00~16:00  地點：立夫教學大樓 1 樓 104 講堂講者：Jun Kimura, Ph. D.( 木村淳) NIPPON GENE CO., LTD

簡介：本次特別邀請日本基因公司(NIPPON GENE CO., LTD.) 木村淳博士(Dr. Jun Kimura)來台演講，說明LAMP(Loop-mediated Isothermal Amplification) 原理及應用:
LAMP技術的關鍵在於特殊的primer設計以及一個具有「置換template模板股」活性的DNA 聚合酶，這個方式中的primer分成兩個部分，一部分（primer的5’端）能直接和template的3’端互補結合，另一部分（primer的 3’端）則藉由一次轉折後（形成一loop），和template略接近5’端的序列互補。
LAMP技術可增幅出具有自我互補能力的DNA片段，形成具有莖環(stem-loop)的啞鈴型結構，藉此連續且重複反應，產生大量的DNA片段，在反應的過程中會有焦磷酸的釋放，與反應液中的鎂離子會形成白色的焦磷酸鎂(magnesium pyrophosphate)沉澱，隨著反應時間的增加，用肉眼即可觀察到大量的白色沉澱，也就是有檢測到目標物。有時尚可加入核酸染劑，然後用UV照射來觀察反應結果，易宜觀察。

LAMP 與 PCR的比較:
LAMP的優點在於每次增幅後，不需要以高溫（94℃）將PCR產物變性（denature）為單股，便能有一段單股結構讓primer黏合，持續PCR 的反應，故只需在65℃便能完成反應，不需要具升降溫功能的聚合脢連鎖反應器（PCR machine），LAMP法具有real time PCR的功能，既省時又省經費。

LAMP的特點大致有下列幾點：
(一) 不需要昂貴的儀器，只需要水浴槽或加熱器等恆溫器即可。對於某些田間檢測、偏遠地區實驗室來說，相當簡單實用。
(二) 因為引子對可辨識目標物6個特異性的區段，所以專一性相對提高。
(三) 反應時間通常只需要40~60分鐘，相較於其它大多數的技術為快，所以可以節省反應時間，在檢防疫的檢測工作上相當有利。
(四) 本方法的靈敏度當高，比一般PCR反應高100~1,000倍，可與Real-time PCR相差不多。
(五) 檢測反應所產生的白色沉澱用肉眼或濁度計即可觀察，相當簡便。若再加入核酸染劑則靈敏度則更佳。
(六) 只要加入反轉錄酶，對於RNA病毒或其它 RNA目標物亦可利用本方法來做檢測。
(七) 如果實驗室有Real-time PCR的儀器，本方法亦可搭配該儀器進行目標物「定量」的檢測。
LAMP法可應用as Genie Platform，如SNP Typing等，本場演講會有精闢的說明。