1. 一般調整冷凍的細胞數為1 - 2x106 cells/mL,並且選用CORNING Cryovial系列產品以提供最好的冷凍細胞保存解決方案。
2. Freezing medium必須含有抗凍劑,一般為(5%-15%)DMSO。
3. 冷凍細胞的降溫過程為慢速降溫,主要讓細胞可以脫水完全,以免細胞內形成冰晶而損傷細胞。一般而言,慢速降溫的時間並不固定,只要遵循每分鐘降低的溫度為1-3℃即可,避免過度急速地降溫。以下為實驗室常見的慢速降溫的流程:一開始細胞從室溫(25-27℃)降低至4℃,10分鐘,之後移到-20℃,30分鐘,在移到-80℃,overnight。最後保存到液態氮桶中。
4. 液態氮桶為一般實驗室常見的細胞保存裝置。液態氮桶內可以分為氣相(-140~ -180℃)與液相(-196℃)。為了避免冷凍小管的破裂與旋蓋的密合度不佳所造成的污染,因此建議冷凍細胞的保存以氣相的方式,以減少直接接觸液態氮的機會,延長冷凍細胞的保存時間。若是以液相液態氮的保存方式,當冷凍管從液態氮桶移出時,可能有爆破危險。
|