China Medical University, Taiwan 中國醫藥大學 研究發展處暨附設醫院醫學研究部 電子報 
第 19 期 2011年09月
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  經驗分享

冷凍細胞與解凍細胞

【冷凍細胞注意事項】
1.       必須先確保細胞是處於最健康的時期(log phase),可使往後在解凍細胞時獲得健康且生長快速的細胞。並且以顯微鏡觀察是否有細菌或是真菌的污染,建議配合Biological Industries 生產的 EZ-PCR microplasma test Kit (20-700-20)來偵測細胞是否遭受黴漿菌的污染。
2.       由於一般的細胞培養基內含antibiotics,因此建議在要冷凍保存細胞的前一週,可以更換為antibiotics free的培養基,以利找出是否有其他不明顯的污染源。
【冷凍保存細胞的步驟】
1.       一般調整冷凍的細胞數為1 - 2x106 cells/mL,並且選用CORNING Cryovial系列產品以提供最好的冷凍細胞保存解決方案。
2.       Freezing medium必須含有抗凍劑,一般為(5%-15%)DMSO。
3.       冷凍細胞的降溫過程為慢速降溫,主要讓細胞可以脫水完全,以免細胞內形成冰晶而損傷細胞。一般而言,慢速降溫的時間並不固定,只要遵循每分鐘降低的溫度為1-3℃即可,避免過度急速地降溫。以下為實驗室常見的慢速降溫的流程:一開始細胞從室溫(25-27℃)降低至4℃,10分鐘,之後移到-20℃,30分鐘,在移到-80℃,overnight。最後保存到液態氮桶中。
4.       液態氮桶為一般實驗室常見的細胞保存裝置。液態氮桶內可以分為氣相(-140~ -180℃)與液相(-196℃)。為了避免冷凍小管的破裂與旋蓋的密合度不佳所造成的污染,因此建議冷凍細胞的保存以氣相的方式,以減少直接接觸液態氮的機會,延長冷凍細胞的保存時間。若是以液相液態氮的保存方式,當冷凍管從液態氮桶移出時,可能有爆破危險。
【解凍細胞步驟】
相對於冷凍細胞,解凍細胞必須以快速回溫(60 to 90 seconds at 37°C)的方式以避免水進入細胞後產生冰晶而造成細胞的傷害。之後以低速離心將Freeze medium移除,置換成culture用的medium。
資料來源:進階生物科技股份有限公司

 

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