Odyssey® Infrared Imaging System簡介
傳統的蛋白質定量與western偵測方法，多數採用化學冷光偵測系統。冷光偵測是一種Time-dependent enzymatic assay，會因為時間之不確定性而導致定量結果的再現性不高。一般偵測冷光之方式有傳統之 x-ray film 曝光方法或用高階CCD影像擷取系統。然這些方法之限制性在於x-ray film本身之線性度極差﹔而影像系統則往往會因抓不準最適曝光時間而需一再測試。此外冷光偵測最大之缺點是只能做到單色偵測，若您想於同一片blot上觀察兩種不同之target proteins，最常用的方法就是將blot stripping後再re-probe。這種做法可能會有blot背景值過高、訊號過弱等情況發生，且無法掌握re-probe之反應條件與前次相同。
根據上述之缺點與限制，LI-COR® Bioscience 公司針對蛋白質之定量及定性研究，研發Odyssey® Infrared Imaging System偵測系統。此一系統最獨特之優點是採用〝近紅外光雙色偵測〞(Infrared two colors detection) 方式，提供您在單張blot中，可同時分析兩種不同之target proteins，此一技術在蛋白質分析研究方面為一大突破。Odyssey® Infrared Imaging system提供direct detection方法，直接在二級抗體上標定Infrared dye (IRDye®)，用近紅外光雷射光源激發，即可得到穩定且清晰的訊號，同時可作數據之分析，操作快速、方便，取代傳統冷光需加substrate、底片曝光及沖洗等步驟。獨特之〝近紅外光雙色偵測〞，使您一次實驗中可就獲得兩種蛋白質表現定量結果。對於從事訊息傳導實驗之研究者而言，一次實驗即可同時分析total & phosphorylated protein。
本校現有此設備，目前放置於研發處貴儀室，歡迎有需求者上網預約使用。
Odyssey的特性：
1. 獨立之偵測系統：LI-COR Odyssey Infrared Imaging System具備兩支獨立之固態雷射 (680nm；780nm) 及偵測器，雷射壽命長達40,000小時，維護容易。
2. 絕佳的準確度與再現性：因採用近紅外光雷射科技：比放射性及冷光標定法，有更高的敏感性(可偵測0.37pg的蛋白質)及準確性 (linear range達5 order)。
3. 網路連結方式操控儀器：可藉由網路連線，於任何時間、地點及作業平台進行主機操控或結果分析。
4. 節省實驗所需成本與時間：反應過程不需再加受質來呈色，也不需壓片、沖底片等複雜、費時、昂貴的步驟。
5. 雙色螢光：雙色紅外光雷射及偵測器，可用雙色螢光同時標定，可在一次實驗內準確完成蛋白質表現差異之分析，節省一半時間、成本。
6. 多功能的分析軟體：影像分析部分包含自動條帶偵測、分子量計算、絕對定量與相對定量分析、矩陣點定量分析及基因差異性表現分析
Odysseyâ近紅外光影像掃描及分析系統各項應用項目:
Ø Quantitative Western Detection 雙色偵測蛋白質並精準定量
Two-Color Blots - enables the quantitative analysis and wide linear dynamic range that chemiluminescence can’t. Two independent channels (colors) for normalization or loading controls
In-Gel Westerns - avoids transfer problems by directly detecting target proteins within the polyacrylamide gel matrix
Ø Cell-Based Assays 細胞免疫染色快速篩檢並定量蛋白質表現
In-Cell WesternTM Assay - A quantitative immunofluorescent assay for simultaneous analysis of two different proteins in fixed cultured cells. Perform the assay in 96- or 384-well plates
On-Cell WesternTM Assay - enables quantitative monitoring of cell surface protein expression. Monitor receptor internalization and recycling by detecting loss and re-appearance at the cell surface
Ø Microwell Assays
FLISA - Eliminates the enzymatic reaction and the need to time and stop the colorimetic reaction
Transcription Factor Arrays - Involves substitution of IRDye 800CW® Streptavidin for the horseradish peroxidase conjugate
Ø Protein Gel Documentation
2D gel (Harris, LR et al. J Proteome Res. 6(4):1418-25 (2007).)
IRDye Blue or Coomassie-stained SDS-PAGE gels
Ø Nucleic Acids
EMSA/Gel Shift- by replacing the radiolabeled oligonucleotides with IRDye® end-labeled oligonucleotides. Direct fluorescent detection in the wet gel.
DNA Staining - SYTO®60 red fluorescent nucleic acid stain
Ø Small Animal Imaging 小動物活體影像擷取(目前未添購此配件)
With MousePOD™ in vivo imaging accessory
Accommodates up to 3 mice
IRDye optical probes available
Ø Organ + Tissue Section Imaging
Sections are imaged at 21 µM resolution for macro-level analysis.
Ø Protein Arrays
Plated based, Membrane based and Slide based
Lysate (reverse phase) arrays
Quansys Multiplex ELISA (cytokine/chemokines)
【相關圖片】
↑回上頁
|
